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-酶的特点
-酶是识别特定的核苷酸序列,并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子,-性内切酶可分为两大类,即i类酶和ⅱ酶。早先从大肠杆1菌中发现的ecok、ecob就属于i类酶。
其分子量较大;反应过程中除需mg2+外,还需要s-腺苷-l甲硫氨酸、atp;在dna分子上没有特-的酶解片断,这是i、ⅱ类酶之间zui明显的差异。
ⅱ类酶有ecor i、bamh i、hind ⅱ、hind ⅲ等。其分子量小于105道尔顿;反应只需mg2+;重要的是在所识别的特定碱基顺序上有特-的切点,因而dna分子经过ⅱ类酶作用后,可产生特-的酶解片断,这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。
-酶有什么作用?
在dna重组技术中,-酶主要用于:
1.在特异位点上切割dna,产生特异的-酶片段;
2.建立dna分子的-酶图谱;
3.构建基因-;
4.用-酶切出的相同的粘性末端,以便重组。
5.许多-用切割外来dna的方法进行自我保护,如切割感1染性噬菌体的dna.这些-产生一种能切割dna的-内切酶,一旦发现外来dna便将其切割,因此它们有效地-了噬菌体对-的感1染,故这种-内切酶被称为-酶.
6.每种-酶特异识别专一dna序列,并在切割位点将其准确切割.
根据-酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将-酶分为三种类型,分别是第yi型type i、第二型type ii及第三型type iii。
第yi型-酶同时具有修饰(modification)及认知切割(restriction)的作用;另有认知(recognize)dna上特定碱基序列的能力,通常其切割位(cleavage site)距离认知位(recognition)可达数千个碱基之远。例如:ecob、ecok。
第二型-酶只具有认知切割的作用,修饰作用由其他酵素进行。所认知的位置多为短的回文序列(palindrome sequence);所剪切的碱基序列通常即为所认知的序列。是遗传工程上,实用性较高的-酶种类。例如:ecori、hindiii。
第三型-酶与第yi型-酶类似,同时具有修饰及认知切割的作用。可认知短的不对称序列,切割位与认知序列约距24-26个碱基对。例如:ecopi、hinfiii。
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