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与血浆储存要求

　　大多数-好的时间是收集后2小时内在室温下进行分析。如果或血浆样品不能在收集后2小时内进行处理，可将样品放在加盖的试管中放入4℃冰箱中短期储存1周或放入20℃或更冷的冰箱中长期储存1周至6个月。但有些指标检测例外，例如氨、乳酸盐和血气分析需要在采集后并在冰浴或4°c立即被分析。胆红素在暴露于直射光时会降解，因此-用于胆红素分析应该避光可用铝箔包裹离心管。检测乳酸脱氢酶建议室温储存。

(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的hbss液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，-液37℃-15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止-，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再-一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板种植液1，37℃，5%co2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5um的，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。

肝纤维化动物模型法：

180～200g wistar或sd大鼠，皮射40%-50%ccl4，油溶液(0.3ml/100g)，每周2次，第2周 始，隔日以20％-30％酒精lml灌胃(或作为饮料)，饲以单纯玉米面(混以0.5％胆固醇)，共10周。

评价：第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死， 第4周开始有较薄的纤维间隔形成，第6周间隔进一步增厚，有假小叶形成：第8周形成厚的纤维间隔，分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。

该模型是目前-常采用的动物模型，-且时间短，肝纤维化进展稳定，适合于过程的动态研究。