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备型柱子柱压上升，柱效下降，怎么办？

对高的价值的制备柱来讲，延长柱子寿命是很重要的。一般要注意保护柱子，一般来说，制备柱子一般需要保护柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

1如果您所分离的样品中杂质较多而您在上样前没有经过过滤0.45微米，一些颗粒性杂质会积聚在柱头造成柱压升高。

2也有可能是因为您所使用的流动向中含有缓冲盐的原因，结晶或发生化学变化而堵塞。可以把柱子冲一冲。

3流动相是否符合液相色谱的要求？是否过滤处理？

反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的tfa和---或其他杂质？

tfa是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样---的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。

首先，冻干的办法应该可以几乎完全地除去tfa和---，---实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是很简单、有效的。

其次，如果你的---的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，尽量装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/ml以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成tfa盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的---，再干燥后形成---盐。

疏水色谱填料

在传统固定相长链根部嵌入特殊基团，该“极性嵌入基团”能够和硅胶表面的硅---或流动相中的水形成氢键，对硅胶基质形成一种保护作用，且减少碱性化合物与硅---的作用，---了碱性化合物的---分离，对具有复杂结构的碱性化合物表现出不同于传统反相色谱的分离性能，即不需要“使用 ph>;7 的流动相来抑制碱性物质的解离”的方式就可以对碱性物质实现---的色谱保留；