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-残留ELISA试剂盒厂家- 北京中检维康公司

发布者:北京中检维康生物技术有限公司  时间:2021-11-19 






elisa试剂盒的操作方法——双夹心法

1.包被:用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。简称洗涤,下同。

2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。同时-白孔,阴性对照孔及阳性对照孔。

3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标经滴定后的稀释度0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5. 终止反应:于各反应孔中加入2m-0.05ml。

6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测od值:在elisa检测仪上,于450nm若以abts显色,则410nm处,以空白对照孔调零后测各孔od值,若大于规定的阴性对照od值的2.1倍,即为阳性。



elisa试剂盒——elisa实验通用规则

1、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。

2、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗-。倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 3、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制ph7.4,0.02m的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的-钠后可长期保存。 4、底物是光敏感的,要在临用前现配。 5、检测前,要打开酶标,使之稳定10分钟以上。 6、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。 7、待检样品要澄清,否则会影响结果。 8、温浴时间应遵守试剂盒规定。 9、应尽量做双孔实验,这样才能-数据的准确性。 10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。



elisa试剂盒——elisa实验常见问题及解决方案

不正常的标准曲线

1  错误的方法重悬标准品  加入正确量的溶液重悬标准品,重悬充分

2  标准品稀释错误  按照说明书要求稀释标准品

3  标准品污染  使用-的灭菌吸头, 标准品贮存于2-8 ℃

4  错误的倍比稀释步骤  按照说明书倍比稀释标准品

5  波长选择错误 tmb为底物和以opd为底物的试剂盒均有使用,而 前者比色波长为450nm,后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。

6  标准品混用  不同批号试剂勿混用

7  试剂盒在运输途中时间太长,温度太高,标准品失活  尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温

8  elisa未终止而直接检测450nm和620nm tmb显色需终止后检测,否则会出现620nm比450nm读数高的现象。数值仍有梯度规律



elisa试剂盒主要实验原理

·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;

·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;

·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。




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