-残留ELISA试剂盒厂家- 北京中检维康公司
1.包被:用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。简称洗涤,下同。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。同时-白孔,阴性对照孔及阳性对照孔。
3. 加酶标:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标经滴定后的稀释度0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2m-0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测od值:在elisa检测仪上,于450nm若以abts显色,则410nm处,以空白对照孔调零后测各孔od值,若大于规定的阴性对照od值的2.1倍,即为阳性。
1、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
不正常的标准曲线
1 错误的方法重悬标准品 加入正确量的溶液重悬标准品,重悬充分
2 标准品稀释错误 按照说明书要求稀释标准品
3 标准品污染 使用-的灭菌吸头, 标准品贮存于2-8 ℃
4 错误的倍比稀释步骤 按照说明书倍比稀释标准品
5 波长选择错误 tmb为底物和以opd为底物的试剂盒均有使用,而 前者比色波长为450nm,后者为492nm。双波长比色分析优于单波长。
6 标准品混用 不同批号试剂勿混用
7 试剂盒在运输途中时间太长,温度太高,标准品失活 尽量缩短运输时间,夏季应放冰块降温
8 elisa未终止而直接检测450nm和620nm tmb显色需终止后检测,否则会出现620nm比450nm读数高的现象。数值仍有梯度规律
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;
·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;
·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。
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