贵州大肠菌群检测仪承诺守信「多图」

大肠菌群的菌落计数检验方法

大肠菌群的菌落计数

检验方法

用灭菌吸管吸取待检样液1.0ml，加入无菌平内。每个样品接种三个连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿。于每个加样平内倾注15ml45~50℃的aiiz-gal琼脂，迅速轻轻转动平，使混合均匀。待琼脂深固后，再倾注3ml-5ml aliz-sal琼脂覆盖表面。同时将aliz-gal琼脂倾人加有1ml上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的无菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，翻转平板，干37+1℃培养箱培养18h-24h。取出平板，计数紫色(或红色)菌落。

培养基检验原理:胰酪胨提供碳氮源、---和矿物质满足---生长的需求;---可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氡二钾是培养基ph缓冲剂:月桂基---钠可抑制革兰氏阳性菌的生长;大肠菌群可产生-半乳糖苷酶，分解液体培养基中的酶底物茜素-b-d-半乳糖苷(aliz-gal)，使素游离并与固体培养基中的铝、钟、铁、钱离子结合形成坚备(或红色)的罄合物，使菌落呈现相应的颜色。

大肠菌群平板计数法检测

平板计数法

　　大肠平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中，选取2～3 个适宜的连续稀释度， 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿接种1ml。同时取1ml生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将 15ml～20ml冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂vrba加入每个平皿中。小心地旋转平皿，使培养基与样液充分混匀，等到琼脂凝固以后，再加入3ml～4mlvrba 覆盖平板表层。翻转平板铺匀后，放在 36℃±1℃培养18～24h。平板菌落数按照以下方法选择：选取菌落数在 15cfu～150cfu之间的平板，分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。典型菌落呈现紫红色，并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 不小于0.5mm。证实试验为：从vrba平板上挑取10 个不同类型的典型和菌落，分别移种到bglb肉汤管内，36℃±1℃培养24～48h，观察产气情况。凡是bglb肉汤管产气，就可以报告是大肠菌群阳性。证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数，再乘以稀释倍数，就是每gml样品中大肠菌群数。

　　大肠菌群平板计数法操作起来比较简便，带有菌落的平板可以直接计数，还可以观察菌落特征，可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应，便于得出定量结果，这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小，所以肉眼有时难以观察，需要用放大镜仔细辨认。验证实验需要挑选菌落，因此受人主观的影响很大，如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。

gb/t4789.3

gb/t 4789.3-2003《食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》虽然被后更新的方法代替，但关于规范食品中大肠菌群指标的检测工作公告(2009年 6号)明确-，为规范食品中大肠菌群指标的检测工作公告如下：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“mpn/100克或mpn/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》(gb/t 4789.3-2003)进行检测;以“mpn/克或mpn/毫升”、“cfu/克或cfu/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》(gb/t4789.3-2008)进行检测。后gb/t 4789.3-2008被gb 4789.3-2016替代，故检测样品前需根据产品标准认真选择方法。