亲和层析原理:利用生物分子之间的专一性识别性或特定的相互作用的分离技术称为亲和分离技术。在该技术中,亲和分离过程是通过引入亲和配基得以实现的。所谓亲和配基,------亲和柱,是指具有对生物分子专一识别性或特异相互作用的物质。将亲和配基固定在不同的介质上,可得到不同的亲合分离技术,------亲和柱报价,如固定在层析介质上,达到专一性层析分离的技术称为亲和层析技术。将亲和配基接在分离膜上,得到亲和膜分离技术。
1、上样
亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短,通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件,包括上样流速、缓冲液种类、ph、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。
2、洗脱
亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种:特---洗脱和非特---洗脱。
亲和柱的功能基于抗原与间可逆的特---结合反应,使其可从复杂样品基质中特---地回收目标化合物。上样后,柱中以共价键形式偶联在凝胶上的会与抗原即目标化合物特---结合,杂质不会被结合,------亲和柱,大部分随样品溶液流出小柱。通过淋洗的方式除去小柱内剩余杂质后,使用其他洗脱液根据对应产品说明书选择进行洗脱即可得到洁净的目标化合物溶液,可直接用于后续检测。
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